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慢病毒濃縮試劑(5x)說明書

 更新時間:2023-04-18 點擊量:89

慢病毒濃縮試劑(5x)說明書

上海起發生物科技有限公司(Shanghai BioHub Biotechnology Co., Ltd.)屬于上海起發實驗試劑有限公司(2009年成立)旗下的子公司,成立的初衷是建立上海起發生物自有品牌,打造優質的生物試劑民族自有品牌。降低成本的同時,把好生物產業鏈中的國產生物試劑品質關。未來讓每一個和我們一樣擁有民族情懷的企業,共同創世界優秀的中國生物制造企業,圓夢中國。

產品詳情

貨號

規格

價格

78EG10002-100ml

100ml

¥750.00

 

產品描述

慢病毒濃縮試劑(5x)是針對慢病毒富集而優化的聚合物材料,它提供了一種簡單、快速、高效的慢病毒顆粒濃縮方法。只需將慢病毒上清液與慢病毒濃縮試劑按比例混合,短時間孵育,采用標準離心機進行離心即可得到慢病毒顆粒沉淀。超濾、超速離心法等病毒濃縮法,操作時間長,步驟繁瑣,且通常會有細胞碎片和血清蛋白等的污染,病毒純度低。使用本產品進行病毒濃縮后,病毒滴度可提高10-100倍,病毒回收率最高可達約90%,病毒損失少,并且病毒在濃縮過程中能保持病毒生物活性。整個實驗過程可在4小時內快速完成,無需超速離心即可獲得出色的回收效率。

產品特點

 簡單快速——操作簡單,無需超速離心,確?;钚?,實驗耗時不超過4小時

  濃縮效果優——病毒滴度可濃縮10-100倍以上

  回收效率高——慢病毒回收效率高達90%以上

  應用范圍廣——適用于所有類型的慢病毒顆粒

使用方法

使用方法

1.將含有慢病毒顆粒的培養基轉移至無菌容器中,300xg離心10分鐘以除去細胞碎片。

  ?為保證病毒活性,濃縮前的病毒上清液應盡量選擇新鮮收集的病毒原液。

  2.使用0.22μm過濾器過濾上清液至無菌容器中。

  ?如果使用濾膜過濾,推薦使用低蛋白結合力的纖維素醋酸酯或聚醚砜(PES)膜,不推薦使用硝酸纖維素膜(NC)。

  3.向每4體積含慢病毒的上清液中加入1體積慢病毒濃縮試劑(5x),使慢病毒濃縮試劑(5x)稀釋為工作濃度(1x)。

  4.將上述混合物于4℃搖床中慢速孵育3小時或過夜。

  ?慢病毒顆粒在4℃可穩定長達4天。

  5.將混合物4℃4000xg離心25分鐘。離心后,慢病毒顆??赡茉谌萜鞯撞匡@示為米色或白色沉淀。

  6.小心棄去上清液,4℃4000xg離心5分鐘,再次棄盡殘余液體,應盡量避免吸走沉淀物,該沉淀物即為慢病毒顆粒。

  7.用初始體積(原上清液體積)1/10-1/100預冷的慢病毒保存液重懸病毒顆粒,使用移液器小心吹打,重懸慢病毒顆粒。

  ?重懸病毒沉淀時,吹打操作要輕柔,可選擇慢病毒保存液(LS110R)、Complete medium或FBS重懸慢病毒。

  8.小體積分裝慢病毒,儲存于-80℃冰箱或液氮中,留取少量病毒測定滴度。

  ?應盡量避免慢病毒反復凍融,否則會降低病毒滴度。

實驗案例分析

 

注意事項

 1.為了您的健康安全,請規范操作,穿戴實驗服與手套開展實驗;

  2.所有慢病毒操作均需在生物安全柜(BSL2級)中進行;

  3.本產品僅供科研使用,請勿用于臨床診斷及治療。

運輸及保存方法

冰袋(wetice)運輸。4℃保存,有效期12個月。

產品描述

細胞周期(cell cycle)是指連續分裂的細胞從一次分裂完成開始到下次分裂為止的全過程,分為間期和分裂期(M期),細胞間期又分為休眠期(G0期),DNA合成前期(G1期),DNA合成期(S期),DNA合成后期(G2期)整個周期可以表示為:G0-G1-S-G2-M。

本公司生產的細胞周期檢測是通過經典的碘化丙啶染色色 (Propidium iodide staining,PI staining)方法進行周期分析的檢測試劑盒。PI是一種DNA的熒光染料,可以結合雙鏈DNA產生熒光,其熒光強度與DNA的含量成正比。經碘化丙啶染色后假設G0/G1期細胞的熒光強度為1,那么含有雙份基因組DNA的G2/M期細胞的熒光強度的理論值為2,正在進行DNA復制的S期細胞的熒光強度為1-2之間。凋亡細胞由于細胞核發生濃縮以及發生DNA片段化導致部分基因組DNA片段在染色過程中丟失,因此凋亡細胞碘化丙啶染色后呈現明顯的弱染,即熒光強度小于1,在流式檢測的熒光圖上出現所謂的sub-G1峰,即凋亡細胞峰。利用流式細胞儀進行熒光分析從而對DNA進行定量,實現細胞周期檢測。

產品組成

本試劑盒常用于貼壁細胞或者懸浮細胞的培養,如果檢測對象為組織樣品,必須消化成單個細胞后在進行染色檢測,規格為50T,每T可檢測的樣本的細胞數量在10-100萬之間。

 

 

 

名稱

規格

保存條件

染色緩沖液

25 mL

-20℃

碘化丙啶染色液(20X)

1.25 mL

-20℃

RNase A (50X)

0.5 mL

-20℃

運輸與保存

冰袋運輸,-20℃保存一年。

實驗步驟

1. 細胞樣品的準備:

a. 對于貼壁細胞:收集培養液上清,PBS潤洗細胞一遍,胰酶消化細胞,加入前面收集的培養液終止消化,得到的細胞懸液1000g離心5min收集細胞沉淀備用。

b. 對于懸浮細胞:1000g左右離心3-5 min,沉淀細胞。

(如果細胞沉淀不充分,可以適當延長離心時間或稍稍加大離心力)

2.細胞固定:

(1)向步驟1收集得到的沉淀中加入300 μL預冷的PBS,輕柔吹打混勻,輕柔渦旋的過程中滴加700 μL預冷的無水乙醇,最后于4℃固定30 min或更長時間。通常固定2 h或以上更能保證染色效果,固定12-24h可能效果更佳。

(2)1000g左右離心5 min去除固定液,預冷PBS清洗一遍后再次離心,小心吸除上清,可以殘留約50微升左右的PBS,以避免吸走細胞。輕輕彈擊離心管底以適當分散細胞,避免細胞成團。

3. 細胞染色:

(1)參考下表配制碘化丙啶染色液(配置好的碘化丙啶染色液4℃保存,宜當日內使用):

名稱

1個樣品

染色緩沖液

0.5 mL

碘化丙啶染色液(20X)

25 μL

RNase A (50X)

10 μL

總體積

0.535 mL

 

(2)每個樣品中加入0.5 mL的碘化丙啶染色液緩慢并充分重懸細胞沉淀, 37oC避光孵育30min。隨后可以4oC或冰浴避光存放。染色完成后宜在24 h內完成流式檢測。

4.流式檢測分析:檢測激發波長為488 nm處紅色熒光,用流式細胞儀對DNA含量進行分析,確定細胞周期變化情況。

注意事項

(1)需自備PBS70%乙醇,整個過程避光操作。

2)為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套。

3)本產品僅作科研用途!



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